01준수사항

• 01 정확한 감염부위와 적절한 시기에 채취해야 합니다.
• 02 모든 검체는 지정된 멸균용기에 채취하고 분변 이외의 검체는 무균조작으로 시행되어야 하며 면봉, 시험관, 수송배지, 혈액배양배지 등은 사용 전에 오염 여부나 유효기간을 확인한 후 사용합니다.
• 03 혈액배양배지, 수송배지는 실온에 보관하며, 수송배지로 검체를 보낼 때는 반드시 2개의 면봉 모두에 검체를 잘 묻혀서 건조되지 않도록 배지에 깊이 찔러 넣어 보냅니다.
• 04 임상소견, 검체종류 및 채취부위와 시간, 항생제 투여 여부를 기재하여야 하며 검체채취는 통상적 으로 항생제 투여 전에 합니다(기재된 정보에 따라 1차 접종배지의 종류, 배양조건, 동정을 요하는 균의 종류 등이 달라질 수 있으므로 반드시 기재합니다).
• 05 수송배지를 즉시 배양할 수 없을 때는 냉장보관하여 운송합니다. 단, 수막구균이나 임균 등의 Neisseria 균속이나 Haemophilus 균속이 의심되는 검체는 30℃ 이하로 내려가면 사멸하므로 실온이나 37℃에 보관합니다.
• 06 혈액배양용기에 붙어있는 바코드가 보존되도록 발행된 바코드를 다른 위치에 세로로 부착합니다 (그림 A).
• 07 균주 검체를 의뢰할 경우 균주를 확인할 수 있도록 사면을 가리지 않는 위치에 바코드를 부착하여 의뢰합니다(그림 B).

그림A

그림B

02검체별 채취 방법

• 01 혈액(blood)
• • ① 검체채취 시 피부 정상균의 오염을 방지하기 위해 피부소독용 알코올, 요오드액으로 소독 후충분히 건조하여 채혈하는 것이 중요합니다.
  • ② 항생제 사용 전에 채혈하여야 하고 일반적으로 발열 주기를 예측할 수 있는 경우는 발열 직전에 채혈합니다. (예측이 어려울 경우에는 발열 시 채혈합니다).
  • ③ 동시에 혈액채취를 시행하는 방법이나, 24시간까지 시차를 두고 시행한 방법 간에 양성률의 차이가 없다고 보고됨에 따라 채혈은 동시에 하거나 짧은 시차를 두고 2~3회 실시하는 것이 권장됩니다.
  • ④ 회에 혈액 20.0mL을 채취하여 호기성 배지와 혐기성 배지에 각각 10.0mL씩 접종을 권장 합니다. 혈액이 많을수록 양성률이 높아지기 때문에 충분한 혈액량을 접종합니다. (소아인 경우 2.0~4.0mL을 채취하여 소아용 배지에 접종합니다).
  • ⑤ 감염성심내막염이나 카테터(catheter)관련 혈관 내 감염과 관련된 지속적 균혈증에서는 시차를 두고 채혈하는것이 추천됩니다. 감염성심내막염은 혈액배양 양성률이 90% 이상으로, 급성심내막염인 경우 병원성이 강한 균주에 의한 것이 많으므로 즉시 혈액배양을 시행하는 것이 좋으며, 항균제 투여 전 30분 이내에 채혈합니다. 아급성심내막염인 경우는 30분~1시간 간격을 두고 채혈합니다.
• 02 객담(sputum)
• • ① 객담은 폐렴의 원인균을 진단하기 위해서 사용하며, 아침에 일어나 양치한 후 큰기침을 하여 무균컵에 채취합니다. (객담을 받을 수 없는 소아환자는 흡인으로 채취합니다).
  • 

    ⓐ 맑은 물로 세척합니다.

    ⓑ 심호흡을 3회 실시하여 폐 깊숙히 있는 가래가 나올 수 있도록 합니다.

    ⓒ 깊은 기침을 하여 객담을 받으며, 침이 섞이지 않도록 주의합니다.

  • ② 침이 많이 섞이면 구강 내 상재균이 많이 포함되어 정확한 결과를 얻기 힘드므로, 검사실에서 객담도말 표본을 그람 염색하여 100배 시야에서 상피세포와 백혈구를 관찰하여 객담의 품질을 판정합니다.
    (Murray와 Washington 변법에서는 두 가지 세포 수의 비율에 따라 6개의 군으로 나누며, 객담의 품질 등급에 의해 4~6등급은 수용되며, 1~3등급은 부적합 검체로 판정합니다.)
  • ③ 검체는 채취 후 즉시 검사실로 운반하며, 지연될 경우에는 냉장 보관해야 합니다.
• 객담의 품질 등급(grade of sputum quality)

  Grade	Number of cell / Low-power field
  	Epithelial cell	WBC
  1	＞ 25	＜ 10
  2	＞ 25	10~25
  3	＞ 25	＞ 25
  4	10~25	＞ 25
  5	＜ 10	＞ 25
  6	＜ 10	＜ 10

  Acceptable sputum: Grade 4, 5, 6 / Unacceptable sputum: Grade 1, 2, 3

• 03 체액(body fluid)
• • ① 뇌척수액(CSF)
  • · 무균적으로 3개의 용기에 채취하며, 그 중에 2번째 채취한 뇌척수액을 미생물 검사용으로 사용합니다. · 채취 후에는 즉시 밀봉하여 검사실로 보내야 하며, 검사가 지연이 되면 실온 보관합니다.
  • ② 기타 체액(관절액, 흉수, 복수 검체 등)
  • · 단 한 개의 집락이 자라도 의미가 있으므로 검체채취 시 오염되지 않도록 하며, 주사기로 흡인 후 무균 상태로 보관합니다. · 시험관으로 옮기면 혐기성세균이 사멸할 수 있으므로 주의를 요합니다.
• 04 분변(stool)
• • ① 변에 혈액, 점액이 섞여 있는 부분을 선택적으로 약 1~2g 정도를 채취합니다.
  • ② 변을 채취할 수 없을 때는 면봉을 항문 괄약근 1인치 정도까지 넣어 부드럽게 회전시켜 검체를 얻은 후, 수송배지에 넣어 보관합니다.
  • ③ 장염 세균을 검사하기에 가장 좋은 검체는 급성기에 채취한 설사변으로 검체 유출로 인한 오염 가능성이 있으므로 완전하게 밀봉합니다.
  • ④ 장티푸스균의 분리는 감염 후 2~3주의 변에서 2~3회 반복하여 검사할 경우 양성률을 높일수 있습니다.
  • ⑤ 설사 증세를 보이면서 항균제 사용력이 있는 연령 6개월 이상의 모든 환자에 대하여 C.difficile toxin 검출을 위해 액상이거나 부드러운 변을 용기에 받아 C. difficile toxin 검사를 시행합니다
    (면봉 검체는 적합하지 않습니다).
  • ⑥ 직장도말 검사로 성매개감염(sexually transmitted disease,STD)를 위한 검체는 실온에 보관합니다.
  • ⑦ 바륨 관장을 한 대변으로는 검사하지 않습니다.
• 05 요(urine)
• • ① 아침 첫뇨가 가장 적합하며, 세균배양을 하기 위해서는 환자의 요도 주위를 잘 소독한 후 처음몇 mL을 버리고 중간뇨 10.0mL 정도를 무균적으로 채취합니다.
  • ② 카테터뇨는 소변을 볼 수 없는 환자나 무균 조작이 반드시 필요한 환자에게서만 시행합니다.
  • ③ 혐기성배양 시 치골 결합부에서의 흡인뇨(suprapubic aspiration)를 무균적으로 채취합니다.
  • ④ 항산성균 배양시 아침 첫 뇨를 계속해서 3~5일간 채뇨하는 것을 원칙으로 합니다.
  • ⑤ 반드시 멸균용기에 채취한 후 30분 이내에 보내야 하며, 부득이한 경우에는 반드시 냉장 보관 하고 채뇨 시간을 기록합니다(Neisseria 균속이 의심되는 검체는 30℃ 이하로 내려가면 사멸 하므로 실온이나 37℃에 보관합니다).
• 06 농(pus)
• • ① 주사기로 흡인하여 채취하는 것이 원칙이며, 채취 후 즉시 밀봉합니다.
  • ② 주사기로 흡인액을 얻지 못하는 개방된 농인 경우에는 두 개의 면봉으로 병소 깊이 채취하여 수송배지에 넣어 보냅니다.
• 07 생식기 검체
• • ① 여성 생식기 : 자궁경관에서는 질 내의 세균이 오염되지 않게 하면서, 윤활제를 쓰지 않고 질경(speculum) 을 이용하여 자궁경부를 보이게 한 다음 면봉으로 점액을 제거한 후 새로운 면봉을 사용하여 자궁경부내강(endocervical canal)에 넣어 검체를 채취 후 수송배지에 넣습니다.
  • ② 남성 생식기 : 요도 검체는 분비물이 많을 때는 면봉으로 채취하고, 적을 때는 요도의 2cm 깊이까지 가느 다란 면봉을 넣어 채취 후 수송배지에 넣습니다.
• 08 조직(tissue)
• • 조직 검체는 멸균용기에 멸균 식염수를 넣거나 멸균 식염수를 적신 거즈로 싸서 마르지 않게 검사실로 보냅니다.
• 09 혐기성세균 배양을 위한 검체
• • ① 혐기성세균은 공기에 노출되면 사멸되기 쉬우므로 검체의 수송 및 채취가 중요하며, 산소에 노출되는 것을 막기 위해서는 CO2나 N2 가스를 채운 시험관이나 병 등을 사용합니다.
  • ② 흡인했을 때는 주사기에서 공기를 배출시킨 후, 마개로 막고 즉시 검사실로 보냅니다. 혐기성 세균이 정상상재균으로 존재하는 검체(객담, 요, 대변, 인두액 등)는 혐기성 배양을 하지 않고, 주로 체액, 농, 경기관 흡인액, 생검 조직 및 혈액 등을 대상으로 합니다.

01검체채취

02검체운송 방법

03보관 및 주의사항

• 바이러스 배양검사 검체별 안내

  검체종류	채취 및 검체량	검체용기	주의사항
  Stool	3~5g (설사변일 경우 5g)	멸균용기	· 발병 후 4일 이내 검체채취 · 수막염은 발병 후 2주까지의 검체가능 · 기저귀 착용 시 대변을 긁어서 보냄
  Urine	5.0mL (신생아: 2.0~3.0mL)		CMV 배양의 경우 VTM 용기 사용
  CSF	3.0~5.0mL		혈액이 혼입된 검체는 혈액 내에 존재하는 항체가 바이러스 배양을 억제
  Rectal swab	면봉을 직장 내 2~4cm 부위에서 rub and rotation 방법으로 채취		대변을 채취하지 못할 경우 사용
  상부호흡기	① 비인후흡입액 ② 비인후도찰물 ③ 인후도찰물 바이러스 분리율 ① ＞ ② ＞ ③		· 발병 후 수 일 이내에 채취 · 인후도찰물 보다는 비인후흡입액이 오염이 적어서 좋음
  하부호흡기	· 기관지흡입물 · 기관지세척액		· 발병 후 수 일 이내에 채취 · 객담도 사용할 수 있으나 흡입하는 것보다 효율성이 떨어짐
  Skin, Mucous membrane lesion	수수포(vesicle)를 26 gauge 주사침이나 uberculin syringe 또는 면봉을 사용하여 채취		· 비궤양성 병소일 경우 면봉을 사용하여 병소 부위를 지른 후 수송배지에 넣음 · 주사기 이용 시 수송배지에 넣음 (흡인 및 배출과정 반복)
  Eye	결막 : · 면봉을 소독된 생리 식염수에 적신 후체채취 · 두 번째 면봉으로 남아있는 물기를 제거		운송배지에 사용된 면봉 모두를 넣음
  Cervical urethral	면봉검체 사용		-
  Saliva	2.0~3.0mL		-
  Semen	-		CMV 배양에 주로 이용
  Blood	전혈 5.0~8.0mL	Heparin, Sod.citrate	-

• 01 비인후흡입액 & 비인후도찰물(nasopharyngeal aspirate & nasopharyngeal swab)
• • ① 만약 어린 소아에서 인두 도말이 용이하지 않을 경우 그림 A, B와 같은 요령으로 비인후도말 또는 비강흡입물 채취 검체로 대신할 수 있습니다
  • 
  • ② 비인후도말 시 멸균면봉을 하비갑개의 중하부 근처에서 점막을 부드럽게 3-4회 돌려서 채취 합니다.
  • ③ 비강흡입물 채취 시에는 비강을 통하여 카테터 끝이 인두 후벽까지 다다르게 한 다음 진공 흡입을 걸고 카테터를 약간씩 돌리며 천천히 부드럽게 빼내면 됩니다. 진공흡입 후 카테터가 비인후부에 10초 이상 길게 머물지 않도록 주의합니다.
  • ④ 카테터를 멸균 생리식염수(약 1㎖)로 세척하여 무균용기에 담습니다.
  • ⑤ 비인후흡입액(nasopharyngeal aspirate) 3~5mL을 무균용기에 넣고, 비인후도찰물 (nasopharyngeal swab)은 VTM 용기에 넣어 4℃ 냉장 상태에서 보관 후 운송(운송 시내부온도 4℃ 유지) 합니다.
• 02 인후도찰물(throat swab)
• • ① 환자의 입을 벌리고 반드시“아-"하는 소리를 실제로 내게 합니다.
  • ② 왼손으로 설압자를 잡고 설압자로 혀를 누릅니다.
  • ③ 오른손에 멸균면봉을 잡고 인두 후벽을 면봉으로 360°로 3~4회 돌려 도말합니다. 이때 환자 목젖을 건드리면 환자가
    구역질을 하게 되므로 목젖을 피해서 도말을 합니다.
  • ④ 채취한 인후도찰물(throat swab)은 VTM 용기에 넣어 4℃ 냉장상태에서 보관 후 운송(운송 시 내부온도 4℃ 유지) 합니다.